采用自行研制的脫細胞基質豬肋骨作為支架材料,復合兔成骨細胞和血管內皮細胞,對其生物相容性、抗原性和細胞毒性進行觀察。 方法:實驗于2003-04/10在四川大學華西醫院人類疾病生物治療教育部重點實驗室完成。用物理、化學方法制備脫細胞基質豬肋骨。體外培養兔成骨細胞、血管內皮細胞。而后將試驗分成3組進行。①成骨細胞組:將成骨細胞與脫細胞基質骨材料復合。②血管內皮細胞組:血管內皮細胞與脫細胞基質骨材料復合。③成骨細胞+血管內皮細胞組:成骨細胞+血管內皮細胞與脫細胞基質骨材料復合。④對照組:單純成骨細胞。于培養1,3,5,7d分別用倒置相差顯微鏡、 組織學切片和掃描電鏡觀察脫細胞基質異種骨的生物相容性、抗原性;用流式細胞儀檢測材料對細胞周期和DNA含量的影響,了解材料對細胞有無毒性的影響。 結果:①脫細胞基質骨掃描電鏡觀察:脫細胞基質骨的骨小梁結構完整,骨陷窩空虛,未見細胞成分殘留。②各組細胞的生長、分化和增殖情況倒置相差顯微鏡觀察:3組細胞與脫細胞基質骨材料復合培養12h后,細胞在各組材料表面和孔隙內均可黏附和生長。③組織學觀察:MASSON染色顯示3組細胞在材料表面和孔隙內大量增殖,并分泌細胞外基質。以成骨細胞+血管內皮細胞組材料表面黏附的細胞數量多。組織學切片染色顯示,各組細胞沿材料邊緣緊密附著,細胞與材料的組織相容性良好。④各組細胞黏附、生長、增殖和基質分泌情況掃描電鏡觀察: 3組細胞與材料復合培養5d后,細胞緊密黏附在材料表面。成骨細胞呈梭形或多角形,相鄰細胞間有突起相互連接。血管內皮細胞呈橢圓形,有角狀突起,與材料附著緊密。其中,成骨細胞+血管內皮細胞組材料表面黏附大量細胞,并有較多膠原形成。血管內皮細胞組材料表面膠原形成很少。⑤細胞周期和DNA含量:成骨細胞+血管內皮細胞組1d,3dDNA合成期高于單獨細胞組,無異倍體細胞。 結論:脫細胞基質骨具有良好的生物相容性、極低的抗原性、無細胞毒性和致瘤性。成骨細胞與血管內皮細胞聯合培養細胞在脫細胞基質異種骨中有很強的增殖潛力。 |
